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糖基化分析的重要性

編輯:南京科瑞芯生物科技有限公司時間:2021-09-06

糖基化分析的重要性

糖鏈常用的分析方法有:液相色譜法、毛細管電泳法和高效陰離子交換色譜法。但無論是液相色譜法還是毛細管電泳法,都必須使用專用試劑進行熒光衍生。此衍生耗時長(4小時)且會導致唾液酸丟失,不能準確分析含唾液酸樣品。且也無法分析磷酸化糖及硫酸化糖。而離子色譜無需衍生,定量準確,可以覆蓋分析所有糖類型。

 

離子色譜-糖基化分析方法

 

高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法,是目前領先的糖分析方法,具有無需衍生、分離度好、靈敏度高、同時適用所有糖修飾形態等諸多優勢。

N—糖基化修飾的糖鏈可以通過肽糖苷酶F或肽糖苷酶A酶切作用,或者肼解作用從糖蛋白上釋放出來。糖鏈經凈化后可直接進樣,無需衍生,避免了衍生化過程中唾液酸化聚糖的結構改變。

離子色譜還可以和高分辨質譜聯用,實現對色譜峰的鑒別。以Q Exactive為代表的Orbitrap超高分辨率質譜對未標記的糖具有高靈敏度,可解析糖鏈結構。安培檢測器、高分辨質譜和離子色譜聯用,可同時解決糖鏈的定性和定量分析。

單抗糖鏈主要由葡萄糖胺、半乳糖胺、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、唾液酸等單糖組成。單糖組成測定可以從基礎水平上對單抗的糖組成差異給出解析。

 

對于中性糖和氨基糖的分析,通常使用酸水解的方式,使蛋白中的單糖釋放。樣品水解后,直接進樣,無需衍生。

單抗糖鏈主要由葡萄糖胺、半乳糖胺、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、唾液酸等單糖組成。單糖組成測定可以從基礎水平上對單抗的糖組成差異給出解析。

 

對于中性糖和氨基糖的分析,通常使用酸水解的方式,使蛋白中的單糖釋放。樣品水解后,直接進樣,無需衍生。


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